电泳技术

本实验室电泳技术采用琼脂糖凝胶为支持物的法国Sebia公司生产的ＨＹＤＲＡＳＹＳ自动电泳仪、Ｐhoresis光度自动扫描分析系统，此技术特点是电泳分离的条带清晰，分辨率高、重复性好、避免交叉污染，电泳后可自动染色和脱色，并自动烘干，烘干后的胶片可用来直接扫描和保存。目前我室已开展的项目有血清蛋白电泳、免疫固定电泳、非浓缩尿蛋白电泳、乳酸脱氢酶同工酶（ＩＳＯ－ＬＤＨ）电泳、肌酸激酶同工酶（ＩＳＯ－ＣＫ）电泳、糖化血红蛋白（ＨbA1c）电泳、血红蛋白(Hb)电泳等，其临床应用范围广泛，对于临床的诊断、辅助诊断具有很高的价值。
　　　　　　　　一 血清蛋白电泳
１、原理：
利用血清中各种蛋白质等电点的不同，在ＰＨ8.6±０.１Ｔris巴比妥缓冲液中，在一定的电场强度下，各种蛋白质所带电荷不等，电泳的迁移率不同而分成Alb、α１、α2　、β、γ五个区带。
２、特点：
全面反映血清中各蛋白质成分，并对之半定量；
３、临床意义：　
①、肾病综合症：白蛋白显著降低，α２和β球蛋白显著增加，γ球蛋白有轻度或明显降低。
②、急性肝炎：早期无明显变化，发病２周后则白蛋白、α２和β球蛋白减少，γ球蛋白增高，２个月后白蛋白和α２球蛋白可接近正常，但γ球蛋白增高可持续时间更长。
③、慢性肝炎、肝硬化：白蛋白明显减少，α２和β蛋白可能轻度增加或降低、γ球蛋白显著增加。肝硬化时还可出现β-γ桥连现象。
④、MM时可在α２~γ区带间出现单克隆M蛋白。
⑤、各种急、慢性炎症时可出现α１、α２、γ增高，β下降

二　免疫固定电泳
１、原理：
血清在琼脂糖电泳后 ，直接用抗血清作用于待检蛋白，进行抗原－抗体反应，使抗原在电泳位置上被免疫固定，同时与电泳而未经免疫固定的对照品比较，用以判别待检蛋白的成分。
２、特点：
将血清蛋白电泳、高分辨率与抗原－抗体特异性免疫反应相结合，对蛋白进行定型和分型，其灵敏度高，可检测到５０－１５０mg/dl含量的单克隆抗体；特异性高，对鉴定免疫球蛋白增殖病有确诊意义。
３、临床意义：
确诊各种免疫增殖病，并对之分型。
三、非浓缩尿蛋白电泳　
１、原理：　　　　　　　
十二烷基磺酸纳（SDS）是阴离子去垢剂。在尿液中加入SDS中性（ph7.0）缓冲液后与样本中蛋白连接形成SDS－蛋白质复合物，从而消除了蛋白质间的电荷差别。然后进行琼脂糖凝胶电泳，使尿液当中的蛋白质完全按照分子量大小分成不同区带。本实验能区分生理性、肾小球性、肾小管性及混合性蛋白尿，是目前肾病诊断、治疗常规项目。
２、特点：
按分子量大、小将尿中蛋白进行分离，其诊断符合率高（与病理　　诊断相符）；灵敏度高，最小监测水平为１５mg/L，能量化，对肾脏疾病的诊断、鉴别诊断、疗效观察和判断预后颇有价值。
３、临床意义：
鉴别生理性蛋白尿与不同的肾脏损伤引起的病理性蛋白尿，后者分为肾小管性蛋白尿（分子量〈７0kDa〉、肾小球性蛋白尿（分子量＞70kDa）及混合性蛋白尿（同时存在分子量＜７0kDa 、＞７0kDa 、=70Kda ）
　　　　　

四、乳酸脱氢酶（LDH）同工酶电泳
１、原理：
乳酸脱氢酶根据其亚基结构不同分五种类型：LDH1(H4) 、LDH2(H3M)、 LDH3(H2M2)、 LDH4(HM3)、和 LDH5(M4)，不同的同功酶分别来自不同组织。LDH电泳是根据其各同功酶等电点不同和电泳迁移率不同进行分离，再与呈色底物作用使各同功酶区带显色，光密度扫描确定其百分率，来帮助诊断组织损伤部位。
２、特点：
临床中血清及组织同工酶的分析和鉴定比只测定酶的总活性更能准确地反映疾病的部位、性质和预后。尤其对心肌梗塞的诊断有重要价值。
３、临床意义：
①、 心肌梗死和心肌炎以ＬＤＨ１和ＬＤＨ２升高为主，特别是ＬＤＨ１较ＬＤＨ２增高更多，ＬＤＨ１／ＬＤＨ２>１。
②、 当心梗出现心力衰竭、心源性休克等并发症时ＬＤＨ１和ＬＤＨ２的百分比相对下降，而ＬＤＨ５的百分率显著上升。
③、 肝癌、肝炎、肝硬化均有ＬＤＨ５升高。急性肝炎时，ＬＤＨ１和ＬＤＨ２相对下降，ＬＤＨ５升高；肝硬化时ＬＤＨ２下降，ＬＤＨ５升高；肝癌时ＬＤＨ１和ＬＤＨ２下降，ＬＤＨ３和ＬＤＨ５上升。
④、 各种溶血性疾病如自身免疫性溶血性疾病，如地中海贫血、PNH等均有ＬＤＨ１和ＬＤＨ２升高，但仍为ＬＤＨ２＞ＬＤＨ１；
⑤、 恶性肿瘤时ＬＤＨ３、ＬＤＨ５增高。
　　　　　　五　肌酸激酶(CK)同工酶电泳
１、原理：
ＣＫ根据其结构不同分三种亚型：ＣＫ－ＭＭ（主要来自心肌和骨骼肌）、ＣＫ－ＭＢ（主要来自心肌）和ＣＫ－ＢＢ（主要来自中枢组织）。每一种同工酶分子所带电荷不同，特定电泳条件下在电路中的泳动率各不相同。根据这一特性对ＣＫ进行分离并显色加以分析。
２、特点：
结合ＣＫ总活性，尤其在诊断和排除心梗尤为重要。　
３、临床意义：
①、早期诊断心肌梗死：心肌梗死发病３－６h时 CK-MB升高,20－２４h达峰值。若胸痛发生后４８h CK-MB仍在正常范围内，则可排除急性心肌梗死。
②、诊断梗死延展或再梗死：如果心肌酶谱持续升高，特别是
ＣＫ－ＭＢ升高持续在７２h以上或心梗４８h下降后再次升高，
即可诊断梗死延展或再梗死；
③、ＣＫ－ＢＢ增高见于脑胶质细胞瘤和胃肠道恶性肿瘤。
④、在神经肌肉疾病中的诊断：进行性肌营养不良，　　　　　　
营养不良或假性肥大肌营养不良或皮肌炎时，总ＣＫ比急性心肌
梗死时要高得多。若无并发心肌损害则以ＣＫ－ＭＭ增高为主，
ＣＫ－ＭＢ／总ＣＫ＜５％。
六　糖化血红蛋白（ＨbA1c）电泳
１、原理：
　　在酸性条件下血红蛋白在琼脂糖凝胶电泳中的迁移率取决于Ｈb在凝胶中的吸附情况及其所带的电荷。ＨbA0的Ｎ末端缬氨酸对琼脂　　糖凝胶的磷酸和硫酸基团有较高的亲和力，其迁移速度减慢，而ＨbA1c由于Ｎ末端氨基结合了糖，没有这种亲和力。利用HbA1c和HbA0对琼脂糖凝胶不同的亲和性和迁移性，用电泳方法分离Ｈb的不同片断。
２、特点：
ＨbA1c测定较客观，不依赖于病人的其他条件（如饮食与否、时间等），可用于作为控制血糖情况和评价治疗效果的一项指标。
３、临床意义：
反映６－８周内的血糖水平，一般正常人HbA1c＜６％，ＤＭ病人HbA1c＜７％示其血糖控制较好。

　　　　　七　血红蛋白（Hb）电泳
１、原理：
Ｈb中的珠蛋白和其他蛋白质一样为两性电解质，在不同的缓冲眼液中可带正或负电荷，在电场中向阴极或阳极移动，由于不同的蛋白质之间（正常Ｈb与异常Ｈb）其等电点、分子大小、形状及所带电荷不同，其移动速度不同（电泳迁移率不同），在一定的支持价质中可借以分离．
２、特点：
能全面反映Ｈb中各组成成分，为诊断各种Ｈb病提供重要依据。
３、临床意义：
①、 各种地中海贫血：
α地中海贫血：ＨbA↓、 HbA⒉↓、 HbF↓ ,并出现ＨbH及HbBarts；
β地中海贫血：ＨbA↓、 HbA2↑、HbF↑，出现Ｈeiz小体。
②各种异常血红蛋白病：血红蛋白c病时HbＣ↑ , 血红蛋白s病HbS↑ 等。