间接免疫荧光法{Indirect immunofluorescennce assay ,IIFA}

一．基本操作程序与原理：
将已稀释的待检血清与实验基质进行温育，如果标本阳性(抗体)，IgG、IgA与IgM类特异性抗体与实验基质中相应的抗原结合，然后用适当缓冲液冲洗去未结合物，再根据需要检测的自身抗体Ig类型，选择荧光素标记的相应抗人Ig抗体{IgG,IgA,IgM或IgG、IgA、IgM的混合物}进行第二次温育。此时，已与实验基质中相应抗原结合的人抗体再与荧光素标记的抗人抗体结合。进行冲洗后，滴加甘油缓冲液封片，在荧光显微镜下观察相应部位出现的特异性荧光模式。
二．IIFA的技术特点：
A． 特异性高：阳性和阴性标本的信号强度对比明显。与每种抗体相关的典型的荧光模型出现在该抗体与抗原结合的位置（定位）。
B． 基质中存在完整的抗原谱，可检测出多种抗体，而且检出率高。
C． 可在一种生物基质上同时检测出多种抗不同生化特性抗原的抗体。
D． 当制备酶联免疫分析需要的抗原太困难或复杂时，应首选间接免疫荧光法。
三． IIFA的临床应用：
间接免疫荧光法在临床检验上已用作细菌，病毒和寄生虫的检验与自身免疫病的诊断等方面。目前本科室开展的项目主要在自身免疫病方面的应用，具体项目有以下几种。

ANA 自身免疫病
总ENA 　
ENA 自身免疫病
ds-DNA 自身免疫病
抗精子炕体 不孕
抗角蛋白抗体 类风关
抗心磷脂抗体 抗磷脂综合症
抗肝抗原抗体 自身免疫性肝病
抗线粒体抗体 胆汁性肝硬化
抗中性粒细胞胞浆抗体 血管炎
抗环瓜氨肽抗体 类风关