一、自身免疫和自身免抗体概述
1、自身免疫和自身免疫病
自身免疫和自身免疫病
● 自身免疫：是指机体免疫系统对自身抗原发生免疫应答，产生自身抗体和（或）自身致敏淋
巴细胞的现象。
● 自身免疫病：由自身免疫参与发病机制招致组织损伤或功能障碍的疾病。
自身免疫病的基本特征
● 血液中可以检出高效价的自身抗体和（或）与自身组织成分起反应的致敏淋巴细胞
● 患者组织器官损伤和功能障碍的范围取决于自身抗体或致敏淋巴细胞所针对的自身抗原分布格局
● 患者以女性较多见，发病率随年龄而增高
● 多数原发病病因不清，常呈再遗传倾向性
● 自身免疫病有重叠现象（包括自身抗体）一“病谱”-端重叠
● 病程常呈现慢性迁延和反复发作，有的成为终生痼疾
● 免疫抑制药物治疗有一定疗效
自身免疫病的分类
● 按疾病累及的系统区分：
结缔组织疾病 神经肌肉疾病 内分泌性疾病
消化系统疾病 泌尿系统疾病 血液系统疾病
生殖系统疾病 皮肤组织疾病 呼吸系统疾病
● 按器官特异性分为两类：
系统性自身免疫病（systemic autoimmune disease）
或器官非特异性或全身性自身免疫病一病变广泛、预后不良
器官特异性自身免疫病（organ-specific autoimmune disease）
或局限性自身免疫病一病变局限、预后良好
自身免疫病的“病谱”
器官特异性
非器官特异性
桥本甲状腺炎 类天疱疮 自身免疫性肾小球肾炎 干燥综合征
原发性粘液水肿 恶性贫血 肺肾出血综合征 类风湿关节炎
甲状腺机能亢进 自身免疫性萎缩性胃炎 绝经过早（少数病例） 硬皮病
Addisins病 自身免疫性肝炎 男性不育（少数病例） 多发性肌炎/皮肌炎
Ⅰ型糖尿病 原发性胆汗性肝硬化 溃疡性结肠炎 药物性狼疮
重症肌无力 原发性硬化性胆管炎 克隆氏病 系统性血管炎
多发性硬化症 自身免疫性溶血性贫血 交感性眼炎 抗磷脂综合征
脱髓鞘疾病 特发性血小板减少性紫阗 晶状体源性葡萄膜炎 混合性结缔组织病
寻常天疱疮 特发性粒细胞减少症 系统性红斑狼疮
自身免疫病发病机制 ● 自身抗原的形成： 自身抗原性质的改变—药物作用，病毒感染等 “隐蔽”抗原的释放—精子、眼状晶体、甲状腺、胃壁细胞等 交叉抗原的作用一风湿热（链球菌）、溃疡性结肠炎（大肠杆菌）等 ● 机体免疫系统发育或调节功能异常： 胸腺功能异常一重症肌无力、SLE、RA等常发现胸腺病变 免疫调解机制紊乱--Th和Ts细胞功能、免疫调节网络、多克隆B细胞等 ● 遗传因素： MHC-HLA-B27（AS）、HLA-DR4（R4）、HLA-B5（白塞病）等 细胞凋亡受抑制--Fas基因缺陷 TCR基因多态--RA、SScIDDM等相关 ● 内分泌因素 自身免疫病好发于育龄女性病人--性激素，类固醇激素等 2、自身抗体 自身抗体 ● 自身抗体：是指抗自身细胞内，细胞表面和细胞外抗原的免疫球蛋白 ● 自身抗体是自身免疫和自身免疫病重要特征之一 ● 某些自身免疫病伴有特征性的自身抗体（谱） ● 分类：脏器特异性自身抗体 脏器非特异性自身抗体 自身抗体检测临床意义 ● 临床疾病诊断、鉴别诊断--疾病标记性抗体或特异性抗体 ● 判断疾病的活动性及预后，观察治疗反应，指导临床治疗 ● 进一步研究和阐明自身免疫病发病机制 生理性自身抗体 ● 正常人血清中可存在多种微量的自身抗体或致敏淋巴细胞 ● 免疫稳定效应—可清除体内衰老变性的自身成分 ● 同年龄有关—60岁以上者50%以上存在自身抗体 ● 自身抗体效价低：包括ANA、RF、SMA、PCA、AMA等 ● 非病理性自身抗体：疾病过程中伴随产生，与发病机制无关 严重烧伤、冻伤--抗皮肤抗体 心梗、心脏大手术--抗心肌抗体 3、自身免疫病实验室诊断新进展 自身抗体研究发展简史 ● 1948年Haragraves等发现LE细胞现象 ● 1957年Holborow等应用IIF检测ANA ● 1961年Beck等发现ANA不同荧光染色模型60-70年代IIF、ID、CIE应用→新的自身抗体陆续发现 ● 1979年Towbin等把免疫印迹技术应用于抗原检测80年代IB、RIP应用→蛋白多肽水平认识自身抗体 ● 1987年DNA重组技术开始应用自身抗体研究 近十年应用分子生物学技术→新的自身抗原不断发现、 抗原蛋白cDNA克隆表达、抗原蛋白分子表位确定→促进自身免疫疾病发病机制、免疫学诊断研究 自身免疫疾病实验室诊断新进展 ● 抗原纯化技术提高，合成肽抗原，重组抗原应用→大量商品化检测试剂盒出现→ 自身抗体检测标准化、规范化（IIF Kit、ELISA Kit）→检验水平提高 ● 总抗体检测→靶抗原特异性抗体检测(ANCA、AMA、APL抗体……) ● 抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA）谱（anti-PR3、anti-MPO、anti-BPI……） ● RA早基诊断相关自身抗体（anti-RA33/36、anti-Sa、APF、AKA……） ● 抗磷脂综合征（APS）与抗β2—糖蛋白抗体 ● 谷氨酸脱羧酶抗体（anti-GAD）与成人隐匿性自身免疫性糖尿病（LADA） GAD、ICA、IAA→胰岛素依赖型糖尿病（IDDM）预测→免疫干预治疗 ● 自身免疫性肝病相关自身抗体 ● Graves眼病患者与抗眼肌膜抗原反应抗体 ● 神经副肿瘤综合征相关自身抗体（anti-Hu、anti-Ri、antiYo……） 双链DNA抗体
系统性红斑狼疮（SLE） Sm抗体
系统性红斑狼疮 SS-B抗体
干燥综合征（SS） 着丝点抗体
进行性系统性硬化症，局限型 Scl-70抗体
进行性系统性硬化症，弥散型 PM-Scl(PM1)抗体
多发性肌炎/皮肌炎/重叠综合征 Jo-1抗体
多发性肌炎/皮肌炎 高滴度RNP抗体
混合性结缔组织病 肾小球基底膜（GBM）抗体
肺出血肾炎综合征（Goodpasture’s） 肝肾微粒体抗体（LKM-1）
Ⅱ型自身免疫性肝炎 平滑肌抗体（SMA）
Ⅰ型自身免疫性肝炎 线粒体抗体2型（M2）
原发性胆汗性肝硬化（PBC） 丝集蛋白抗体（AFA）
类风湿关节炎 抗桥粒抗体
寻常天疱疮 肌内膜抗体（EMA）
麸质过敏性肠病 相关疾病建议检测的自身抗体项目： 1．
系统性红斑狼疮（SLE） —抗核抗体（ANA） —可提取性核抗原（ENA），特别是Sm抗体 —抗双连DNA（dsDNA） —抗核糖体P蛋白（rRNP） —抗心磷脂抗体（ACL）等 2．
类风湿性关节炎（RA） —类风湿因子（RA-IgM） —抗角蛋白抗体（AKA） —抗核周因子（APF） —抗RA33/36抗（新产品！）：对RA新的血清学诊断标准。 —抗环瓜氨酸肽抗体（CCP-新产品！）：对RA新的血清学诊断标准。 —抗Sa抗体 3．
干燥综合征（SS） —抗核抗体（ANA） —ENA —抗SS-A抗体（Ro） —抗SS-B抗体（La） —抗延腺导管抗体 4．
硬皮病（Scl） —抗核抗体（ANA） —ENA 进行性系统性硬化症（PSS）—抗Scl-70抗体发生率75%且特异性高。
—抗PM-Scl抗体 发生率50-70% 进行性系统性硬化症局限型（CREST综合征）—抗着丝点抗体为该病的特异和标志性抗体 发生率为80%-95% 5．
混合性结缔组织病（MCTD） —抗核抗体（ANA） —ENA —高滴度的抗核糖核蛋白（nRNP）抗体为该病的标志性抗体 6．
多发性肌炎（PM）及皮肌炎（DM） —抗核抗体（ANA） —ENA —Jo-1及Mi抗体多见于PM，PM-Scl及Ku抗体多见于PM与硬皮病的重叠；这四种抗体对PM都很特异。 7．
自身免疫性肾脏疾病（如抗肾小球基底膜肾炎） —抗核抗体（ANA） —抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA）：分核周型（pANCA）和胞浆型（cANCA） —抗肾小球基底膜抗体（GBM） —抗肾小管基底膜抗体（TBM） —循环免疫复合物（CIC） 8．
寻常天疱疮及类天疱疮 —抗桥粒抗体：该抗体的滴度与疾病的活动性相关 9．
大泡性类天疱疮 —抗表皮基底膜抗体：非特异性指标 10．
溃疡性结肠炎（UC）和克罗恩病（CD）---炎症性肠病 —抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA） —抗小肠杯状细胞抗体：多出现于UC疾病中且呈高滴度 —循环免疫复合物（CIC）：大约30%UC病人中存在该抗体 —抗胰外分泌腺腺泡抗体：多出现于CD病人中且呈高滴度 11．
自身免疫性（或慢性）萎缩性胃炎和恶性贫血 —抗胃壁细胞抗体（PCA） —抗内因子抗体（IFA）：对恶性贫血特异性高 12．
麸质过敏性肠病（腹腔病） —抗肌内膜抗体（EMA）：敏感性和特异性极高 —抗麦胶蛋白抗体 —抗网硬蛋白抗体 13．
自身免疫性肝炎（AIH） —抗核抗体（ANA） —抗平滑肌抗体（ASMA） —抗肝肾微粒体抗体（LKM） —抗可溶性肝抗原抗体（SLA） —抗肝特异性脂蛋白抗体（LSP） —抗肝细胞膜抗原抗体（LMA） —抗肝细胞胞质抗原1型抗体（LC-1） 14．
原发性胆汁性肝硬化（PBC） —抗线粒体抗体（AMA） 15．
自身免疫性甲状腺疾病（如Grave’s病、桥本甲状腺炎、甲亢等） —抗甲状腺球蛋白抗体（TG） —抗甲状腺微粒体抗体即甲状腺过氧化物酶抗体（TPO） —抗TSH受体抗体 —抗眼肌抗体 16．
胰岛素依赖型糖尿病（IDDM）、 —抗胰岛细胞抗体（ICA） —抗谷氨酸脱梭酶抗体（GAD） —抗胰岛素抗体 17．特发性慢性肾上腺皮质功能减退症（自身免疫性Addison’s病） —抗肾上腺皮质抗体（AAA） —抗睾丸间质细胞抗体 —类固醇细胞自身抗体 17．
重症肌无力（MG） —抗骨骼肌抗体 —抗乙酰胆碱受体抗体 18．
特发性扩张型心肌病、心肌炎 —抗心肌抗体 19．
自身免疫性溶血性贫血（AIHA） —抗红细胞抗体 20．
特发性血小板减少性紫癜（ITP） —抗血小板抗体 21．
自身免疫性眼病（晶状体原性眼内炎及交感性眼炎） —抗晶状体蛋白抗体 —抗葡萄膜抗体 22．
不孕不育症（免疫性不孕） —抗精子抗体 —抗子宫内膜抗体 —抗卵巢抗体 —抗透明带抗体 23．
神经系统副肿瘤综合征 —抗浦肯野细胞浆抗体（抗Yo抗体） —抗神经元细胞核抗体（抗Hu抗体、抗Ri抗体） 24．
抗磷脂综合征（APS） —抗磷脂抗体（APL） —抗心磷脂抗体（ACL） —抗β2糖蛋白1抗体 抗核抗体概念 ● 传统定义（狭义定义）：指抗细胞核抗原成分的自身抗体的总称 ● 现代定义（广义定义）：是指抗细胞内所有抗原成分的自身抗体的总称 ● 对ANA的理解已不再局限于核成分 一而是指抗核酸（nucleic acid）和核蛋白（nucleoprotein）抗体的总称 ● 靶抗原分布：细胞核（传统）→细胞核、细胞浆、细胞骨架、细胞分裂周期（现代） ● ANA检测在临床上是一个及重要的筛选实验，阳性标志了自身免疫病可能性 ● ANA检测对风湿性疾病的诊断和鉴别诊断具有重要意义 抗核抗体分类 ● 根据细胞内靶抗原分子的理化特性和分布部位，将ANA分类：
抗组蛋白抗体（histones: H1, H2A, H2B, H3, H4, H2A-H2B复合物）
rRNP, Sc1-70,
Jo-1, PCNA, RA33, ANAs 抗非组蛋白抗体
Ku, RANA,Mi-1,Mi-2,PL-7,PL-12……)
抗着丝点抗体（anti-CENP-A, B, C, D, E, F）
抗核仁抗体（抗体：RNA-polymerase-1, PM-Sci/PM-1
Th/To, U3Nrnp/Fibrillaria, 4-6-S-RNA……)
抗其他细胞成分抗体（抗体：高尔基体、中心体、纺垂体、线粒体、溶酶体、
肌动蛋白、波形纤维蛋白、细胞角蛋白、核层蛋白……） ● 间接免疫荧光法（IIF）是检测抗核抗体（ANA）的最佳方法（金标准！），Hep-2细胞和肝组织联合的基质片是检测抗核抗体（ANA）的最佳基质。 IIF检测ANA荧光染色模型 ● 可初步判断相应抗体性质范围一进一步检测特异性抗体 均质型（homogeneous,H）--抗DNA，抗组蛋、抗Ku…… 斑点型（speckid, S）--抗SSA/Ro、抗SSB/La、抗nRNP、抗PL-12…… 核膜型（menbranous, M）--抗dsDNA、抗lamins 核仁型（nucleolar, N）--硬皮病相关自身抗体 胞浆型（cytoplasmic, C）--抗rRNP、AMA、抗Jo-1、抗PL-7、抗PL-12…… ● 可确定抗体特异性—抗PCNA、抗高尔基体、抗中心体…… ● 一种抗体可出现不同的荧光染色模型，不同的抗体可出现同种荧光染色模型 ● 具有提示作用，仅根据此推断抗体特异性是危险的 ● 荧光染色核型判定应注意观察中期细胞（metaphasse cell） ● 稀释的血清（滴度）检测有助于混合型荧光染色模型鉴定 抗核抗体（ANA）的阳性率 活动期95-100%
幼年型风湿关节炎（JRA）20-40% 药物性狼疮（DLE）95-100%
非结缔组织病10-20% 混合性结缔组织病（MCTD）95-100%
慢性活动性肝炎（CAH） 硬皮病（PSS）70-90%
重症肌无力（MG） 干燥综合征（SS）66-80%
慢性淋巴性甲状腺炎 多发性肌炎/皮肌炎（PM/DM）40-60%
正常人5-10% 抗核抗体组合 出现高滴度的U1－nRNP抗体是混合性结缔组织病（MCTD，Sharp 综合症）的标志，阳性率为95％－100％，抗体滴度与疾病活动性相关。U1－nRNP抗体也可见于30％－40％的散播性红斑狼疮患者中，但几乎总伴有Sm抗体。 Sm抗体是散播性红斑狼疮的特异性抗体，与ds-DNA一起，是散播性红斑狼疮的诊断指标，但仅见于20％－40％病人中。 SS－A抗体与各类自身免疫病相关，常见于干燥综合症病人（40％－80％），也见于散播性红斑狼疮（30％－40％），原发性胆汁性肝硬化（20％），偶见于慢性活动性肝炎。此外，100％新生儿红斑狼疮出现SS－A抗体，经胎盘传给胎儿，引起炎症反应。其也可导致新生儿先天性心脏传导阻滞。 抗SS－B抗体仅见于干燥综合症（40％－80％）和散播性红斑狼疮（10％－20％）女性患者中。男女比例为29:1。干燥综合症常同时出现SS－A抗体和SS－B抗体。 Scl-70抗体见于25％－75％的进行性系统性硬化症（播散性）患者中，因实验方法和疾病活动性而异。不出现于局限性硬皮病。 Jo-1抗体见于多肌炎，阳性率为25％－35％。常与肺间质纤维化相关。 抗双链DNA（dsDNA）抗体 临床意义 抗DNA抗体有两种类型：抗天然双链DNA抗体和抗变性单链DNA抗体。抗dsDNA抗体主要识别双螺旋脱氧核糖核酸磷酸支架上的位点，因此与双链、单链DNA均能反应。然而，抗ssDNA抗体识别嘌呤和嘧啶碱基多聚物，不能与双链DNA反应。 抗dsDNA抗体是系统性红斑狼疮的特异性抗体，和抗Sm抗体一起，是该病的血清学标志物，阳性率为60%-90%。 抗ssDNA抗体不仅见于系统性红斑狼疮患者（70-95%），也与很多其它自身免疫性疾病有关（药物诱导性红斑狼疮（60%），混合性结缔组织病（20-50%），多肌炎/皮肌炎，硬皮病（14%），干燥综合症（13%）和类风湿性关节炎（8%））。 抗核糖蛋白抗体及抗Sm抗体 临床意义 高滴度的抗U1-nRNP为混合性结缔组织病（MTCD，
Sharp综合征）的特征，发生率为95%-100%。抗体的滴度与疾病的活动度相关。抗U1-nRNP也出现于系统性红斑狼疮患者，但几乎总是与抗Sm抗体同时出现。 抗Sm抗体对系统性红斑狼疮具有高度特异性。与抗dsDNA抗体一起，被认为对系统性红斑狼疮具有确诊价值，该抗体在系统性红斑狼疮病人中的发生率为20%—40%。 抗核小体抗体 临床意义 除抗dsDNA和Sm抗体外，抗核小体抗体也认为是系统性红斑狼疮的血清学标志。 抗组蛋白抗体 临床意义 抗一种或几种组蛋白抗体或抗H2A-H2B复合物抗体见于药物诱导性（普鲁卡因，肼屈嗪等）红斑狼疮（阳性率95%）。另外，抗组蛋白抗体还可见于30%-70%的播散性红斑狼疮患者和15%-50%的类风湿性关节炎患者 抗SS-A抗体 临床意义 SS－A抗体与各类自身免疫病相关，常见于干燥综合症病人（40％－80％），也见于系统性红斑狼疮（30％－40％），原发性胆汁性肝硬化（20％），偶见于慢性活动性肝炎。 此外，100％新生儿红斑狼疮出现SS－A抗体，经胎盘传给胎儿，引起炎症反应。其也可导致新生儿先天性心脏传导阻滞。 抗SS-B抗体 临床意义 抗SS－B抗体仅见于干燥综合症（40％－80％）和系统性红斑狼疮（10％－20％）女性患者中。男女比例为29:1。干燥综合症常同时出现SS－A抗体和SS－B抗体。 抗Scl-70抗体 临床意义 Scl-70抗体见于25％－75％的进行性系统性硬化症（播散性）患者中，因实验方法和疾病活动性而异。不出现于局限性硬皮病。 抗Jo-1抗体 临床意义 Jo-1抗体见于多肌炎，阳性率为25％－35％。常与肺间质纤维化相关 抗原纤维蛋白抗体 临床意义 到目前为止，抗原纤维蛋白抗体仅见于5%--10%进行性系统性硬化症（硬皮病）患者，且男性病人的发生率（33%）高于女性（14%）。 抗RNA多聚酶Ⅰ抗体 临床意义 到目前为止，抗RNA多聚酶Ⅰ仅见于进行性系统性硬化症（硬皮症）。其发生率为4%。 抗PM—Scl抗体 临床意义 抗PM-Scl抗体可见于重叠综合征：此病表现为多发性肌炎（PM）、皮肌炎以及进行性系统性硬化症（PSS）三者症状的重叠。 抗增殖性细胞核抗原抗体（PCNA） 抗PCNA抗体为系统性红斑狼疮特异性抗体，但其发和率仅为3%。另据文献报道，抗PCNA抗体可能与系统性红斑狼疮患者发生弥散性增殖性肾小球肾炎相关。 抗着丝点抗体(ACA) 临床意义 抗着丝点抗体的靶抗原为着丝粒中的三种不同的蛋白质：着丝点蛋白A（分子量17KD）,着丝点蛋白B（分子量80KD）及着丝点蛋白C（分子量140KD）。主要抗原为着丝点蛋白B，它能与含有各种着丝点抗体的血清起反应。 抗着丝点抗体对进行性系统性硬化症局限型（CREST综合征）有确诊意义。其不仅对该疾病特异性高，且有很高的阳性率（80-95%）。 进行性系统性硬化症（系统性硬化病）可以表现为两种不同类型，通常这两种并不容易区分。局限型患者为选择性肢体受累，而内脏很少受累，弥漫型患者则该病始发于四肢或躯干，内脏严重受累，病情进展迅速，预后不良。 抗线粒体抗体（AMA） 临床意义 对原发性胆汁性肝硬化（PBC）最具有诊断意义的为AMA-2型，发生率可达98%，高滴度时对原发性胆汁性肝硬化的诊断特异性达97%。AMA亚型与疾病的相关性如下： AMA-1：梅毒、干燥综合征。 AMA-2：原发性胆汁性肝硬化。 AMA-3：假性红斑狼疮综合征、药物诱导的系统性红斑狼疮。 AMA-4：原发性胆汁性肝硬化与慢性自身免疫性肝炎重叠。 AMA-5：系统性红斑狼疮、自身免疫性溶血性贫血。 AMA-6：有异丙烟肼引起的药物性肝炎。 AMA-7：自身免疫性肝炎。 AMA-8：自身免疫性肝炎、闭塞性血栓血管炎。 AMA-9：系统性红斑狼疮。 抗核糖体P蛋白抗体 临床意义 抗核糖体P蛋白抗体是系统性红斑狼疮特异性标志抗体之一，可能与系统性红斑狼疮的精神症状有关。 抗中性粒细胞胞浆抗体：胞浆型（cANCA） 临床意义 cANCA对应的靶抗原主要为蛋白酶3（PR3）。 cANCA可见于多种系统性血管炎。主要见于Wegener’s肉芽肿，约占ANCA阳性率的80-95%。CANCA被认为是活动性Wegener’s肉芽肿及微多动脉炎的特异和敏感的标志抗体
。很多资料提示，ANCA阳性的微多动脉炎，通常与肾小球肾炎和/或肺毛细血管炎相关。该抗体还见于变应性肉芽肿性脉管炎（Churg-Strauss综合征）等. 抗中性粒细胞胞浆抗体：核周型（pANCA） 临床意义 pANCA的主要靶抗原为髓过氧化物酶（MPO）。 pANCA见于多种系统性血管炎和肾炎。40-80%的微多动脉炎与pANCA相关。大部分资料提示，ANCA阳性的微多动脉炎，通常与肾小球肾炎及/或肺毛细血管炎相关。 另外，pANCA还见于多种自身免疫性疾病。 抗肾小球基底膜抗体(GBM) 临床意义 活动性的经典的抗肾小球基底膜病——Goodpasture综合征，抗肾小球基底膜抗体几乎100%阳性。另外，在临床完全缓解的病人血清中，该抗体仍可有较高的滴度，大约在一年左右缓慢下降。该病在一年后复发的不常见。通常，肾移植应在该抗体阴性后进行，以免复发。 广义的肺肾综合征或急进性肾小球肾炎该抗体的阳性率仅为15%-20%，因此，需要做更多的血清学检测，如ANCA实验。 具有该抗体的患者的预后往往较差。 抗肾上腺皮质抗体 临床意义 大约60%（不同的研究报告中在36%-80%）的原发性肾上腺皮质功能不全(Addison’s病)者肾上腺皮质抗体阳性。 如果在“正常人”中测到了肾上腺皮质抗体，则可以作为早期肾上腺功能衰竭的信号。 肾上腺皮质抗体常与抗类固醇细胞抗体同时出现；因此，原发性Addison’s病患者常同时有性腺功能衰竭。90%以上的自身免疫性多腺体综合征Ⅰ型患者出现抗肾上腺皮质抗体，80%同时有抗类固醇细胞抗体。 抗肝肾微粒体抗体（LKM） 临床意义 自身免疫性肝炎按血清学标志至少可分为三型：Ⅰ型（“狼疮样”肝炎）以出现抗核抗体(ANA)、平滑肌抗体(ASMA)、肝细胞膜抗体(LMA抗体)为特征；Ⅱ型以出现LKM抗体为特征；Ⅲ型以出现可溶性肝抗原抗体(SLA抗体)为特征。 LKM-1抗体为自身免疫性肝炎Ⅱ型的血清学标志。有报道大约7%的慢性丙型肝炎患者也可检测到LKM-1抗体。LKM-3抗体见于10%-15%的慢性丁型肝炎患者。大约10%的自身免疫性肝炎既有抗LKM-1抗体，也有LKM-3抗体。但在自身免疫性肝炎中该抗体滴度要比病毒性肝炎中高的多。 抗可溶性肝抗原抗体(SLA) 临床意义 抗可溶性肝抗原抗体为自身免疫性肝炎Ⅲ型的血清学标志抗体。自身免疫性肝炎中(AIH)阳性率约20%左右，对AIH诊断特异性几乎达100%。并且对临床治疗具有指导意义（是否使用病毒性肝炎治疗方案还是自身免疫性肝炎治疗方案）。 抗平滑肌抗体(ASMA) 临床意义 检测抗平滑肌抗体的最佳基质是大鼠的胃组织。 抗平滑肌抗体的主要靶抗原为肌动蛋白(actin)。肌动蛋白可以单体（G-肌动蛋白）或聚合体（F-肌动蛋白）形式存在于微丝中。其中F-肌动蛋白自身抗原与自身免疫性肝炎关系密切，而G-肌动蛋白自身抗原则与酒精性肝硬化有关。 抗平滑肌抗体为自身免疫性肝炎Ⅰ型的血清学标志抗体。在自身免疫性肝病患者中该抗体的检测率相当高（至少90%）。高滴度的抗平滑肌抗体（大于1：1000，为抗F-肌动蛋白）对诊断自身免疫性肝炎的特异性几乎达到100%，当抗体以IgG为主时，见于自身免疫性肝炎；以IgG和IgM为主时，见于自身免疫性肝炎与原发性胆汁性肝硬化重叠患者。而低滴度的ASMA(IgM)主要为抗G-肌动蛋白（与酒精性肝硬化相关）和抗非肌动蛋白成分（与酒精性肝炎等相关）。 抗骨骼肌抗体 临床意义 抗骨骼肌抗体常见于年龄较大的（大于60岁）的重症肌无力患者（55%）及成年发病的重症肌无力患者（30%），而较少见于小于20岁的重症肌无力患者。 同时患有重症肌无力及胸腺瘤的病人，其抗骨骼肌抗体阳性率可达80%-90%，而小于40岁的无胸腺瘤的重症肌无力患者该抗体的阳性率仅6%。因此，抗骨骼肌抗体对重症肌无力患者是否并发有胸腺瘤提供的诊断信息是敏感和特异的。特别是20-60岁的患者，为最易并发胸腺瘤的年龄，如果该抗体阴性，基本可排除重症肌无力并发有胸腺瘤的诊断。 抗骨骼肌抗体的检测对于调控骨髓移植后自身免疫并发症（包括移植物抗宿主病）的免疫抑制治疗有一定价值。 抗心肌抗体 临床意义 抗心肌抗体见于心肌炎、特发性扩张性心肌病（IDCM）、风湿热及风湿性心脏病、心梗后综合征、心包切开术后综合征以及重症肌无力等患者。间接免疫荧光法检测是临床测定抗心肌抗体的经典筛选方法，对特发性扩张性心脏病的诊断有96%的敏感性及81%的特异性。且与抗骨骼肌抗体有一定的交叉发应。 抗甲状腺微粒体抗体(TPO) 临床意义 抗甲状腺微粒体抗体的靶抗原为甲状腺过氧化物酶(TPO)。 抗甲状腺微粒体抗体主要以IgG类为主，该抗体主要见于自身免疫性甲状腺病：Hashimoto’s病（85%-100%）、Graves’s病（65%）及原发性黏液性水肿；也见于其它器官特异性自身免疫病如：Ⅰ型糖尿病（14%）、Addison’s病（31%）、恶性贫血（55%）及产后甲状腺炎（15%）等。 抗甲状腺微粒体抗体为人类自身免疫性甲状腺炎较理想的标记抗体，阳性提供了支持自身免疫性甲状腺肿或甲状腺疾病的证据。 抗甲状腺球蛋白抗体(TG) 抗甲状腺球蛋白抗体主要见于： （1）
自身免疫性甲状腺病：淋巴细胞性甲状腺炎（Hashimoto’s甲状腺炎）,阳性率36%-100%；原发性黏液性水肿，阳性率72%；Graves’s病，阳性率50%-98%。 （2）
自身免疫性内分泌病：糖尿病，阳性率20%；Graves’s病，阳性率28%；恶性贫血，阳性率27%。 （3）
其它：甲状腺癌，阳性率13%-65%；非毒性甲状腺肿，阳性率8%。 与抗甲状腺微粒体抗体联合进行测定，高于98%的甲状腺炎患者有针对其中一种或而；两种抗原（即TG或TPO）的抗体。因此，事实上，阴性结果可以排除甲状腺炎的诊断。然而，阳性结果并不能排除如甲状腺肿瘤或甲状腺机能亢进的诊断。通过许多研究表明甲状腺自身抗体阳性是将来易患自身免疫性甲状腺病的危险因子。 抗甲状腺激素受体(TSH受体) 临床意义 原发性甲状腺疾病通常是自身免疫反应的结果。在此反应中，产生针对三个甲状腺特异性抗原（甲状腺过氧化物酶、甲状腺球蛋白和促甲状腺激素受体）中一个或多个的抗体。这些抗体可以引起直接的甲状腺功能障碍，例如抗TSH抗体引起的Graves病，也与桥本氏病或萎缩性甲状腺炎所引起的甲状腺机能减退的自身免疫性破坏性过程紧密相关。例如，抗TG和TPO抗体。 TSH受体自身抗体有多向生物活性。其包括激活、阻滞TSH受体、刺激甲状腺生长和抑制TSH（TB
II）的结合。TSH受体自身抗体的生物活性甚至随病程而变化，例如，从阻滞活性转变为激活活性，但逆过程则很少发生。 TSH受体抗体的检测主要用于Graves病的诊断和区分此病与播散自主性甲状腺病。Graves病是主要具有弥散性甲状腺肿、眼病和皮肤病三种临床症状的甲状腺机能亢进，此病是最常见的甲状腺毒症，多达2%的女性可受此病累及。此病男女比例高达10:1。测定TSH受体抗体可用于Graves病的临床确认。约90%的Graves病患者TSH受体抗体的检测呈现阳性。Graves病病程中检测TSH受体抗体可以提示预后状况，因此在该病的过程中，检测TSH受体抗体能为决策提供重要的信息。在使用抗甲状腺药物治疗疗程后期如果仍有高滴度的抗TSH受体抗体，预示Graves病的复发。 另外，在患Graves病的孕妇妊娠末三月检测TSH受体抗体，如果值太高，提示将会有新生儿甲状腺功能亢进。在患桥本氏病和粘液水肿的孕妇中，阻滞性的TSH受体抗体将穿过胎盘，引起暂时的新生儿甲状腺机能减退。由于患Graves病的患者首先去眼科，TSH受体抗体的检测对于眼病学也是有意义的。 抗胃壁细胞抗体(PCA)和抗内因子抗体 临床意义 抗胃壁细胞抗体的靶抗原为位于胃黏膜壁细胞内的H+/K+ATP酶。此酶是氢转运酶或质子泵，负责胃酸的分泌。 90%的恶性贫血患者可测到抗胃壁细胞抗体。研究表明，恶性贫血为A型萎缩性胃炎的晚期表现。A型萎缩性胃炎的特征为胃底和胃体的病理损害，包括胃黏膜萎缩、胃黏膜壁细胞和主细胞的选择性丧失以及黏膜下淋巴细胞浸润。贫血是内因子缺乏（内因子为壁细胞所分泌，饮食中维生素B12的吸收需要内因子的协助）的直接后果。 抗胃壁细胞抗体还可用于区分A型萎缩性胃炎与其它非特异性组织学胃炎的类型。另外，该抗体在自身免疫性内分泌病中发生率在20%-30%。 另外，测定抗胃壁细胞抗体的同时测定内因子抗体，有助于恶性贫血的诊断。 抗小肠杯状细胞抗体 临床意义 高滴度的抗小肠杯状细胞抗体主要见于溃疡性结肠炎（UC），阳性率28%-39%。有部分克罗恩氏病患者也可检测出抗小肠杯状细胞抗体。在炎症性肠病(UC或CD)患者的近亲中检测出抗小肠杯状细胞抗体，预示易患炎症性肠病。 此抗体与抗中性粒细胞抗体同时测定时，可将通过血清学方法对溃疡性结肠炎提供的诊断准确性由28%提高到72%。 抗胰岛细胞抗体(ICA)、抗谷氨酸脱梭酶(GAD)和抗胰岛素抗体(IAA) 临床意义 Ⅰ型糖尿病大多数主要由于β细胞的破坏而引起的糖尿病。它有两种亚型，第一类有确切的自身免疫性改变的证据，存在ICA、GAD和/或IAA自身抗体，此为Ⅰ型糖尿病的三大标志性自身抗体。第二类临床表现同上，需要胰岛素治疗维持生命，但无自身免疫机制参与的证据。 在新的胰岛素依赖型糖尿病患者中，抗胰岛细胞抗体的发生率在90%以上。通常在确诊一年后该抗体水平下降。ICA可更早期发现Ⅰ型糖尿病。非胰岛素依赖型糖尿病患者出现抗胰岛细胞抗体阳性，可能以后回发生胰岛素依赖型糖尿病。 谷氨酸脱梭酶抗体（GAD）是使谷氨酸转变为神经递质γ-氨基丁酸的生物合成酶。广泛存在于动物及人的脑和胰岛组织中，并认为GAD可能是糖尿病自身免疫反应的始动靶抗原，用于Ⅰ型糖尿病的鉴别诊断和预测。 抗胰岛素抗体（IAA）：具有诊断意义的IAA应为未曾用过外源性胰岛素的病人体内检出可与胰岛素相结合的自身抗体。IAA的产生与Ⅰ型糖尿病的发生有显著相关性。早期报道，在新诊的未经胰岛素治疗的Ⅰ型糖尿病中，IAA阳性率为18%，随着方法的发展。新发现的Ⅰ型糖尿病中IAA的机制可能与原发于B淋巴细胞的异常或继发于胰岛β细胞损伤时，前胰岛素或其生物合成前体被作为抗原。 抗胰腺腺泡抗体（PAA） 临床意义 高滴度的抗胰腺腺泡抗体主要见于克罗恩病（CD），其发生率为39%。该抗体阳性的克罗恩病患者较该抗体阴性的患者易发生胰腺外分泌功能损害。与中性粒细胞抗体同时检测时，可将克罗恩病的诊断准确性由39%提高到43%。 抗桥粒抗体 临床意义 抗桥粒抗体主要的靶抗原为桥粒的组分，是分子量为130KD及160KD的糖蛋白。糖蛋白的亚组分有三种：Dsg1，为叶状天疱疮（PF）抗体的主要靶抗原；Dsg2，存在于各种上皮细胞中；Dsg3，为寻常天疱疮（PV）抗体的主要靶抗原。 寻常天疱疮及叶状天疱疮为表皮角质细胞间粘连障碍性慢性自身免疫性疾病，导致表皮内水疱的形成，其血清中含有抗桥粒抗体。抗桥粒抗体是天疱疮的特异性标志抗体。通常抗体滴度与疾病的活动性相关，因此，其可用来监测治疗。 抗表皮基底膜抗体 临床意义 通过常规间接免疫荧光法，大约70%的活动性大疱性类天疱疮患者的血清中可测到循环抗表皮基底膜自身抗体。妊娠疱疹患者仅20%-25%阳性。通常该抗体的滴度与疾病的活动性不相关。抗表皮基底膜抗体是一个非特异性指标。 抗角蛋白抗体（AKA） 临床意义 抗角蛋白抗体的靶抗原并不是角蛋白，而是丝集蛋白（filaggrin）。 抗角蛋白抗体主要见于类风湿性关节炎患者，其阳性率为36%-59%，而特异性为95%-99%。由于测定的敏感性较低，因此阴性结果不能排除类风湿性关节炎的诊断。 抗角蛋白抗体的出现可以先于疾病的临床表现，有时可提前几年的时间出现。该抗体还是一个潜在的预后标志。高滴度可能预示着较严重的类风湿关节炎类型。 抗角蛋白抗体与类风湿因子在统计学上是相关的，但它们并不总是同时出现，例如，1/3的RF阴性的类风湿关节炎患者，仍可检测到抗角蛋白抗体，有时还为高滴度。 抗RA33抗体（新产品） 探索抗核周因子(APF)、抗角蛋白抗体(AKA)、抗Sa抗体及抗RA33/36抗体检测对R
A的早期诊断价值…四种自身抗体均可出现在RA确诊前的 病人中，任何两种以上自身抗体阳性对RA诊断早期有较高的价值… 李小峰
唐福林等 中国医学科学院 中国协和医科大学 北京协和医院等 此课题为卫生部重点学科基金项目(97010205) 从APF
到抗CCP抗体——对类风湿关节炎自身抗体的新认识（新产品） 协和医院风湿免疫科：艾脉兴
曾小峰 类风湿关节炎(RA)是一种致畸性疾病，发病2年即可出现不可逆的骨关节破坏。现行的ACR诊断标准主要依靠临床表现、X-线以及类风湿因子(RF)检测，符合此标准时病人常已出现骨关节破坏，加之RF缺乏特异性，都不利于早期诊断早期干预治疗，因此临床需要能用于RA早期诊断的实验室指标。自从1964年证实抗核周因子(APF)[1]是RA的特异性抗体并可在疾病早期出现后，又陆续发现抗角蛋白抗体(AKA)
[2]、抗聚角蛋白微丝蛋白(cytokeratin filament aggregating protein,
filaggrin)抗体(AFA)[3]以及抗Sa抗体[4]都对RA具有高度特异性，可在疾病早期出现，新近认为上述抗体在化学结构上具有相关性，它们的表位都含有瓜氨酸，故称之为瓜氨酸相关自身免疫系统[5]，此系统可能在RA的发病及发展中起作用。2000年，国外首次报道根据filaggrin的cDNA序列合成一条含瓜氨酸的环肽(cyclic
citrullinated peptide，CCP)并用于ELISA检测[6]，发现其对RA具有很好的敏感性和特异性，可视为RA新的血清标志物。因此人们对RA的特异性自身抗体有了新的认识。 一． 抗核周因子与类风湿关节炎 1964年荷兰学者Nienhuis [1]用颊粘膜细胞作为底物，采用间接免疫荧光法检测抗核抗体时，偶然发现细胞核周围的胞浆内有均质形球性荧光颗粒，称之为核周荧光(ANF)，导致荧光发生的因子称为抗核周因子(Antinuclear
Factor，APF)。核周因子定位于人颊粘膜上皮细胞胞浆内的透明角质颗粒，是一种不溶性蛋白，它对冻融敏感，而对多数化学处理则不敏感。 间接免疫光法所测APF抗体主要为IgG型，它是一种不同类风湿因子的抗体，可在RA患者的血清和关节滑液中测出，与性别、年龄无关[7]。APF可在早期类风湿关节炎出现，但其检出率与病程长短无相关性[1]。APF阳性与病情相关，往往提示预后欠佳，尤其是RF阴性的APF阳性病人。APF对RA具有较好的敏感性(50%-80%)和高度的特异性(89%-94%)，可以作为RA的血清特异抗体。鉴于APF以人的颊粘膜上皮细胞为反应底物，挑选合格的人选常较不易，而且用间接免疫荧光法检测，不同实验室以及不同人员间因执行标准和看镜水平不同而使结果报告有较大差异，这在一定程度上限制了它的推广。 虽然从开始就已明确APF的抗原存在于人类颊粘膜上皮细胞的透明角质颗粒中，但APF的具体蛋白成分却不甚清楚，其抗原性一直存在争论。曾有报道，Epstein-Barr(EB)病毒感染患者中能检测到APF，从而认为EB病毒是APF的免疫原。1991年，Hoet
[8]分别用EB病毒的单克隆抗体以及多克隆抗体进行试验，未得到类似结果，在该实验中，他们还发现APF与AKA和filaggrin有着很密却的相关性，以后的实验陆续证明了这一观点。 二. 抗角蛋白抗体与类风湿关节炎 角蛋白是一组不溶性的纤维蛋白，为细胞骨架(cytoskeleton)成分，属于居间纤维。目前已发现5种不同的居间纤维蛋白：索蛋白(desmin)、波形纤维蛋白(vimentin)、神经纤维蛋白(nerofilaments)、胶质纤维蛋白(glial
filament)以及角蛋白(keratin)，后者亦称张力细丝(tonofilament )，是上皮组织和毛发中的分化的结构蛋白。 1979年，Young[2]以大鼠食道为底物，用免疫荧光法检测抗角蛋白抗体，发现它是一种不同于类风湿因子的IgG型抗体，对类风湿关节炎具有很高的特异性。抗角蛋白抗体以未加变性剂固定的大鼠食道中1/3段角质层为底物，制成切片，用间接免疫荧光法检测。以典型的角质层板层状、线状沉积的荧光判为阳性。AKA的敏感性(40%-60%)相对APF和RF要低，但其特异性(94%-98%)却很令人满意。 通过对荧光图型分析发现，局限于角质层线状、板层状的典型的强荧光沉积几乎仅见于类风湿关节炎；基底细胞层、棘细胞层的弥散的胞浆型弱荧光沉积以及角质层的弥散的弱荧光沉积则无特异性，可见于多种疾病。 与类风湿关节炎相关的AKA抗体属于IgG1型，可在血清和关节液中检出，但它在关节液中无浓集现象。AKA可以在类风湿关节炎出现临床表现前检测到[9]，通过分析AKA与临床表现、血液学改变、RF、血沉(ESR)、C反应蛋白、其他自身抗体的检出、HLA-DR4以及影像学改变的相关性，发现AKA与RA的病情严重程度相关，它的出现往往提示预后不良。 自从Young[2]首次报道RA患者血清中可检测出针对大鼠食道角质层的抗体，此抗体就被称为抗角蛋白抗体。考虑到上皮组织角质层除含有角蛋白外，还含有其它多种成份的蛋白，另外，从食道角质层分离出的角蛋白，通过酶联免疫吸附试验(ELISA)和免疫印迹法(western
blot)检测皆未能证实RA患者血清中存在对诊断有意义的针对角蛋白的抗体。试验发现，RA患者血清所识别的大鼠食道角质层中的蛋白并非原来以为的角蛋白而是分子量为40KD的蛋白，即出现于细胞分裂晚期的聚角蛋白微丝蛋白(filaggrin)[10]。用filaggrin预先吸附AKA阳性的RA血清能阻断抗角蛋白反应，由此得出AKA的靶抗原不是角蛋白，而是角质层的filaggrin[10]，但临床仍习惯称为AKA。实验观察还发现，几乎所有的APF阳性的血清AKA都阳性，但相反则不成立，提示APF与AKA有密切的相关性。颊粘膜脱落细胞的透明角质颗粒中不含角蛋白，但透明角质颗粒和食道上皮角质层中都含有filaggrin，而它正是AKA与APF的共同识别表位[11]。 三.抗Filaggrin抗体和类风湿关节炎 1991年，Hoet[8]提出APF与原聚角蛋白微丝蛋白(profilaggrin)共同存在于颊粘膜的脱落细胞的透明角质颗粒中，而且针对filaggrin的单克隆抗体能产生抗核周因子的强荧光，因此他考虑核周因子和原聚角蛋白微丝蛋白的本质是相同的。1993年，通过对大鼠食道角质细胞的蛋白质分析，发现AKA的抗原和filaggrin是相关的，并通过实验证实filaggrin就是AKA的靶抗原。 Filaggrin按其化学结构特点被称为角质层碱性蛋白，是一种碱性、带正电的蛋白，出现于上皮细胞的分化后期。它的前体是磷酸化的原聚角蛋白微丝蛋白(profilaggrin)，在胞浆的透明角质颗粒中聚集，在细胞分裂终末期由颗粒层向角质层转运的过程中去磷酸化而降解成若干个filaggrin，降解过程伴随碱性的精氨酸转化为中性的瓜氨酸。Filaggrin和角蛋白一类的居间纤维相互作用，使角蛋白聚集成紧密连接的粗大纤维，因此filaggrin被认为是构成真核细胞骨架细丝间的基质蛋白，从1981按其功能特点称为聚角蛋白微丝蛋白(cytokeratin
filament aggregating protein)。 1989年，成功地从人的表皮细胞中提取mRNA，根据mRNA序列用随机引物构建cDNA文库，对filaggrin的基因序列、染色体定位及filaggrin的氨基酸组成进行了详尽分析。人类filaggrin的基因是一段长度为972bp的核苷酸序列，编码324个氨基酸，定位于1q21。人类filaggrin基因序列同一克隆及不同克隆间的重复序列之间存在10%~15%的变异，变异主要发生在单个的碱基，也包括电荷的变异。 虽然Filaggrin的理化性质早已为人们熟悉，但直到1993年，Simon采用从人表皮提取的filaggrin第一次用于类风湿关节炎病人的血清学检测[10]，到1998年，关于filaggrin与类风湿关节炎的研究逐渐成为热点。通过对发病1年内的类风湿关节炎的病人2~3年的随访发现抗filaggrin抗体(AFA)与AKA及APF一样，可以在RA的早期，甚至临床症状出现以前呈阳性反应[1]。将早期RA病人随访前后的C-反应蛋白(CRP)、血沉(ESR)、关节肿胀指数、晨僵时间、关节疼痛视觉模拟尺度评分(visual
analogue scale，VAS)、疾病活动评分(disease activity score，DAS)、健康评估问卷(HAQ)以及双手影像学进展等指标进行比较，发现AFA阳性的早期RA病人病情进展较阴性者重，而且骨破坏更为严重。临床观察发现，给予慢作用药治疗后，早期RA患者的AFA的
ELISA检测滴度较治疗前有明显的下降，而且AFA与HLA-DR4正相关，这都提示AFA与疾病活动有关。AFA也可以在关节滑液中检测到，其浓度与血清中AFA的浓度呈平行关系；通过对滑膜组织的研究发现，滑膜组织浸出液的IgG型AFA的浓度是血清中的若干倍，提示分泌AFA的浆细胞位于类风湿血管翳局部。因此，AFA可能参与RA的发病，并可能与软骨与骨的破坏有关。 AFA采用免疫印迹法或酶联免疫吸附试验进行检测，结果的灵敏性和客观性较之APF和AKA的间接免疫荧光试验都是极大的提高。虽然AFA直接以filaggrin为抗原，与AKA及APF存在相关性，但它并不能完全覆盖AKA和APF，三者互相补充能提高RA的早期诊断率[31,32]。AFA特异性约96%，阳性率介于12%~75%(平均在40%左右)，波动范围较大，考虑根本原因可能还在于filaggrin氨基酸的变异型以及其基因的多型性。 四．抗环瓜氨酸多肽(CCP)抗体与类风湿关节炎 1998 年Schellekens[12]和Girbal-Neuhause[13]分别根据filaggrin的cDNA序列合成多肽证实瓜氨酸残基是类风湿关节炎特异的抗filaggrin抗体识别表位的必需组成。通过对基因文库中各个序列号的filaggrin氨基酸序列进行分析，合成含有精氨酸、长度在20个氨基酸残基左右的肽链，同时对应合成一条以瓜氨酸替代精氨酸的相同序列的肽链。肽链分别与纯化的AFA抗体[13]、RA血清反应，只有含瓜氨酸的肽链才能被RA血清和AFA抗体特异性识别；瓜氨酸肽链能抑制RA血清与filaggrin的反应；经过亲和层析所得RA抗瓜氨酸抗体能特异地与大鼠中段食道冰冻切片及人颊粘膜细胞核周因子反应[12]。以上试验显示瓜氨酸是RA血清抗filaggrin相关抗体识别的主要组成性抗原决定簇成分。 2000年，Schellekens[6]将一条由19个氨基酸残基组成的瓜氨酸肽链中的两个丝氨酸替换为半胱氨酸，形成与β-转角具有相似结构的二硫键，合成环瓜氨酸肽(cyclic
citrullinated peptide，CCP)。采用环瓜氨酸肽为抗原用ELISA法检测类风湿关节炎的抗环瓜氨酸肽抗体(anti-CCP)[6]，敏感性和特异性均较用直链线性瓜氨酸肽为抗原有明显提高。 经过对数百例发病一年以内的RA病人进行1~6年的随访发现，anti-CCP可以在类风湿关节炎早期出现[14]。通过对疾病活动评分(DAS)、健康评估问卷(HAQ)以及影像学评分的连续观察，Anti-CCP阳性的RA病人骨破坏较抗体阴性者严重[14]。可见anti-CCP对于RA的早期诊断和预后评估都很有意义。 环瓜氨酸肽能通过人工大量合成高纯度成品，可以满足各种试验要求，抗环瓜氨酸肽抗体用ELISA法检测，实验结果更客观准确，易于质控，加之Anti-CCP具有APF、AKA一样的早期诊断RA、评估病情及预后的价值。因此，anti-CCP是目前所知最有希望在今后全面推广应用的对RA早期诊断的一个自身抗体。 我科从1996年开始开展了对RA早期诊断血清指标的研究，目前APF、AKA已作为常规应用于临床。2000年我科成功地从人上皮提取了filaggrin并建立了免疫印迹法检测AFA的方法。2000我科几乎与国外同步开展了抗CCP抗体的研究，已成功地建立抗CCP抗体的ELISA检测方法。目前我科是世界上仅有的几家能检测抗CCP抗体的检验室之一。这些均提示我科在RA早期诊断血清学检测方面已处于国际先进水平。 参考文献 1.
Nienhuis, R. L. F., and E. Mandema. A new serum factor in patients
with rheumatoid arthritis: the antiperinuclear factor. Ann
Rheum Dis 1964; 23:302-303. 2.
Young B. J. J, Mallya R. K., Leslie R. D.G, et al. Anti-keratin
antibodies in rheumatoid arthritis. Br Med J 1979; 2: 97- 3.
Vincent C, Simon M, Sebbag M et al. Immunoblotting detection of
autoantibodies to human epidermis filaggrin: a new diagnostic
test for rheumatoid arthritis. J Rheumatol 1998; 25(5):
838-846. 4.
Despres N, Boire G, Lopez-Longo F. J., Menard H. A. The Sa system
: a novel antigen- antibody system specific foe rheumatoid arthritis.
J Rheumatol 1994; 21: 1027-33. 5.
Menard HA, Lapointe E, Rochdi M, et al. Insights into rheumatoid
arthritis derived from the Sa immune system. Arthritis Res
2000; 2: 429-432. 6.
Schellekens G. A, Visser H, de Jong B. A. W, van den Hoogen F.
H. J, et al. The diagnostic properties of rheumatoid arthritis
antibodies recognizing a cyclic cit-rullinated peptide. Arthritis
Rheum 2000; 43:155-163. 7. 李小峰, 张乃峥, 李鸿斌, 等. 类风湿关节炎血清学早期诊断. 中华风湿病学杂志 1999; 3: 208-211. 8. Hoet P. M. A, Boerbooms A.
M. Th, Arends M, et al. Antiperinuclear factor, a marker autoantibody
for rheumatoid arthritis: colocalisation of the perinuclear factor
and profilaggrin. Ann Rheum Dis 1991; 50: 611-618.
9. 李鸿斌, 李小峰, 甘晓丹, 等. 抗核周因子等四种抗体联合检测在早期类风湿关节炎诊断中的意义. 中华医学杂志 2000; 80: 20-24. 10. Simon M, Girbal E, Sebbag M, et al. The cytokeratin
filament-aggregating protein filaggrin is the target of the so-called
'antikeratin antibodies'. autoantobodies specific for rheumatoid
arthritis. J Clin Invest 1993; 92: 1387-1393. 11. Sebbag M, Simon M, Vincent C et al. The antiperinuclear
factor and the so-called antikeratin antibodies are the same rheumatoid
arthritis-specific auto- antibodies. J Clin Invest 1995;
95: 2672-2679. 12. Schellekens G. A, de Jong B. A, van den Hoogen F.
H. J, et al. Citrulline is an essential constituent of antigenic
determinants recognized by rheumatoid arthritis-specific autoantibodies.
J Clin Invest 1998; 101: 273-281 13. Girbal-Neuhauser E, Durieux J. J., Arnaud M et al.
The epitopes targeted by the rheumatoid arthritis-associated antifilaggrin
autoantibodies are posttraslationally generated on various sites
of (pro)filaggrin by deimination of arginine residues. J Immunol
1999; 162(1): 585-594。 14. Kroot
E-J J. A, de Jong B. A. W, van Leeuwen M. A, et al. The prognostic
value of anti-cyclic citrullinated peptide antibody in patients
with recent-onset rheu-matoid arthritis. Arthritis Rheum
2000; 43:1831-1835. 抗心磷脂抗体 临床意义 与抗心磷脂抗体相关的临床并发症统称为抗磷脂综合症：静脉和动脉血栓形成，血小板减少症，自发性流产，死产和早产；出现中枢神经系统症状（从头痛到大脑血栓形成）；骨坏死的早期体征，肺高压。 抗心磷脂抗体见于50%的弥漫性红斑狼疮患者和5%-40%的其它系统性自身免疫异常患者（类风湿性关节炎，硬皮病，干燥综合征，Sharp 综合征等）。检出抗心磷脂抗体的患者有发展为静脉和动脉血栓形成的危险（当存在高浓度抗心磷脂抗体时预测值约为80%）。 自发性流产，死胎和早产患者经常可检出抗心磷脂抗体，与是否存在自身免疫病症状无关。但弥漫性红斑狼疮患者更易出现上述孕期并发症（达77%），原因可能包括静脉血栓形成所致的子宫内梗死。 心肌或大脑梗死后检出高滴度抗心磷脂抗体预示出现其它血管并发症的危险率增高，也是梗死后监测病情和预后的指标。 抗心磷脂抗体可见IgA，IgG或IgM亚型，诊断价值最大的为高浓度IgG抗体，但很多患者可检出IgA和IgM型抗心磷脂抗体。另外，有证据表明高浓度抗心磷脂抗体IgG型与血小板减少症高度相关，而高浓度抗心磷脂抗体IgM型和溶血性贫血高度相关。 循环免疫复合物 临床意义 抗体结合抗原形成免疫复合物。免疫复合物与可溶性的细胞效应系统作用导致结合的抗体被清除。机体免疫反应的结果就是不断产生免疫复合物。在正常机体内，由于免疫复合物不断降解，它们一般检测不到或只呈现低浓度。由于免疫复合物的不充分降解而导致的大量循环免疫复合物主要见于感染的急性期或自身免疫病中。 长期的循环或血管外免疫复合物可引起疾病。在器官中这些免疫复合物的降解可引起相应临床症状的炎症。许多疾病均可检测出所涉及的免疫复合物，例如系统性红斑狼疮，类风湿性关节炎，冷球蛋白血症和脉管炎。免疫复合物相关疾病以外的许多其它疾病的血清中CIC的浓度也升高。如，细菌、病毒、寄生虫感染疾病，过敏反应，自身免疫病，皮肤和消化道的慢性疾病、肿瘤和神经疾病。 虽然免疫循环复合物的检测对于特定疾病不具有特异性，但对于免疫病理、疾病的发展和预后能提供有用的信息。免疫复合物的呈现是体内正在进行免疫防护或自身免疫反应的标志。这些免疫反应需用进一步的实验进行鉴定。在某些微生物感染、自身免疫性或肿瘤疾病中，检测循环免疫复合物可用作疾病活动性、评价机体机能和监测疗效的标志。 抗内皮细胞抗体 临床意义 抗内皮细胞抗体见于多种疾病。特别是血管炎（包括原发性的及继发于结缔组织病的血管炎）。抗内皮细胞抗体的滴度与原发性自身免疫性系统性血管炎（Wegener’s肉芽肿、微多动脉炎、Kawasaki病）的疾病活动性相关。测到抗内皮细胞抗体常提示可能有以下情况：系统性红斑狼疮患者有肾脏受累；类风湿关节炎患者有血管炎表现；皮肌炎患者有肺部并发症；严重的硬皮病患者有外周血管闭塞。 抗普肯耶细胞抗体 临床意义 抗普肯耶细胞抗体多见于女性（大于99%）。该抗体通常为高滴度（1：1000）。而脑脊液的滴度通常又比血清的滴度高。抗普肯耶细胞抗体对诊断副瘤性小脑变性（PCD）合并卵巢及乳腺癌高度特异。如果患者测到该抗体，应该进行彻底的骨盆和乳腺检查。如果已知为癌症患者，而又出现了小脑功能紊乱的症状，此时检测到高滴度的抗普肯耶细胞抗体将证实为类瘤性小脑疾患。在肿瘤去除后，抗体滴度会下降甚至消失。在正常人群中该抗体阴性。 抗神经元核抗体 临床意义 抗神经元核抗体1型又称Hu抗体；抗神经元核抗体2型又称Ri抗体。 Hu的靶抗原存在与中枢及外周神经系统的所有神经元，也存在于相关肿瘤细胞内。该抗原在细胞核的含量要高于细胞浆，不存在于核仁中。其分子量介于35-40KD的一组蛋白。 Ri的靶抗原局限于中枢神经系统的神经元。该抗原在细胞核中含量高，而在细胞浆中也有表达，核仁中则不存在。该抗原与55KD及80KD两种神经元蛋白相关。 未发现正常人存在抗神经元核抗体 。Hu抗体比Ri抗体常见。检测抗神经元核抗体对临床诊断非常有用。Hu主要见于类瘤性感觉神经病及类瘤性脑脊髓炎，阳性提示可能存在肿瘤，大多数情况下为小细胞肺癌（SCLC），也可合并有成神经细胞瘤、前列腺癌、肉瘤。Hu还见于类瘤性斜视眼陈挛/肌陈挛。Ri主要见于大脑、脑干、脊髓功能紊乱，较少见于感觉、运动感觉及运动神经病；为乳腺癌或小细胞肺癌的标志之一。 抗肌内膜抗体（EMA） 临床意义 IgA类的抗肌内膜抗体常见于活动性麸质过敏性肠病或疱疹性皮炎。未治疗的麸质过敏性肠病患者IgA型肌内膜抗体的发生率在68%-100%；疱疹性皮炎患者IgA型抗体的发生率为70%-80%，但当伴有严重肠绒毛萎缩的麸质过敏性肠病时，该抗体的发生率可上升到100%。IgA型的抗肌内膜抗体对活动性麸质过敏性肠病的特异性很高，可达99.7%-100%。 麸质过敏性肠病主要见于欧洲人，亚洲人中很少患此病。IgA型抗肌内膜抗体对疱疹性皮炎及麸质过敏性肠病的特异性高于抗麦胶蛋白以及网硬蛋白抗体。近年来，国际上已推荐对怀疑为麸质过敏性肠病的患者首选测定抗肌内膜抗体。
目前比较公认的部分标志性自身抗体
标志抗体
相关疾病
抗DNA抗体（anti-dsDNA, anti-ssDNA）
抗ENA抗体（抗体：Sm, nRNP, SSA/Ro, SSB/La,
系统性红斑狼疮（SLE）
类风湿关节炎（RA）30-50%
基质：Hep-2细胞/肝组织； 阳性：滴度>1：100
在真核生物的细胞中，前体细胞的成熟的pre－mRNA被称为剪接体。大约有30种hnRNP是这个高分子复合物的重要组成。这些蛋白被作为许多风湿类疾病中自身免疫反应的靶原。
在这些蛋白中，有一种分子量为33kD的分子通常和类风湿病人的自身抗体反应，这个蛋白被命名为"RA33"。在后来的研究中，这个抗原分子被确认为hnRNP复合物的A2蛋白。 许多临床研究证实，RA33抗体抗体的出现和RA、慢性多发性关节炎（Chronic
polyarthritis）、SLE和混合性结缔组织病（MCTD）密切相关。特别是用于RA的早期诊断，有着不可替代
RA患者血清中RA33/36抗体阳性率为35.6%(16/45)…这4种抗体应用于对早期RA诊断，有较高诊断特异性和敏感性。除APF外，其余3抗体与RF均无相关性。与RF联合检测，可弥补RF对早期RA的漏诊情况，同时可提高诊断的特异性。我们认为对不能满足分类诊断标准的患者，若4种抗体中有2种或2种以上抗体同时阳性时，应高度疑诊为RA，必要时早期给予积极治疗…
田新平 蒋明 宋琴芳等 中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院风湿免疫科 中华微生物学和免疫学杂志 1998年 第2期
No.2 March 1998
(骨关节疾病)目前有助于早期诊断的标志物有抗核周因子、抗角蛋白抗体、抗RA33/36抗体、抗Sa抗体。
在所有的SLE和MCTD患者中，RA33的出现时有23-60%伴有U1-RNP抗体的增高。特别是在弱的抗U1-RNP反应的时候，检测RA33的抗体含量可以为诊断这些疾病提供重要的、有价值的信息。
另一方面，如果被检测出的抗RA33抗体并没有伴随U1-RNP抗体，几乎毫无例外诊断为风湿性关节炎（rheumatoid
arthritis，RA），RA33可以认为是RA的特异性标记诊断。
这种诊断的灵敏度为35%，特异性非常的高（96%），而且能在类风湿病人的发病初期就诊断出来，这是因为RA33抗体的出现并不依赖于类风湿因子（RF）的出现。RA33抗体检测是一种非常重要的诊断，特别是在类风湿因子（RF）检测阴性的时候。